Turbo Nuclease

Detailní popis

Pro všeobecné laboratorní použití.

Definice jednotky: Jedna jednotka rozloží sonikovanou DNA lososího spermatu na oligonukleotidy rozpustné v kyselině, což odpovídá Δ260 1,0 za 30 minut při pH 8,0 a 37 °C.

Přeprava: dodává se v gelových obalech

Podmínky skladování: uchovávejte při -20 °C
vyhněte se cyklům zmrazení/rozmrazení

Skladovatelnost: 12 měsíců

Forma: tekutá (dodává se v 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 20 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 1 mM DTT a 50 % [v/v] glycerolu)

Koncentrace: 250 jednotek/μl

Použití: V případě potřeby je možné použít i jiné přípravky:
Turbo Nuclease je velmi účinná při rozkladu nukleové kyseliny z proteinových vzorků a používá se v různých aplikacích, kde je vyžadována úplná hydrolýza DNA/RNA:

    Snížení viskozity buněčných lyzátů
    Prevence shlukování buněk
    eliminace nespecifických komplexů protein-DNA před 2D nebo nativní gelovou elektroforézou
    Odstranění nukleových kyselin z rozsáhlých proteinových preparátů

Popis:
Turbo Nuclease je širokospektrá endonukleáza, která štěpí molekuly DNA i RNA nezávisle na tom, zda jsou jedno- nebo dvouvláknové, kruhové, lineární nebo superzávitové. Enzym je vysoce stabilní a aktivní v širokém rozmezí pH a teploty, takže je ideální pro různé navazující procesy, které vyžadují rozklad DNA/RNA jednoduchým, účinným a specifickým způsobem.

    Endonukleáza z rekombinantu Serratia macescens exprimovaná a purifikovaná z E. coli.
    Katalytická aktivita v rozmezí pH 6 až 10 (optimální kolem 8,8) a teploty 0 až 44 °C.
    Vysoká katalytická účinnost (34krát vyšší než u DNázy I)
    Aktivita vyžaduje přítomnost Mg2+ (optimum 2 mM)

Postup:

    Připravte čerstvý, studený lyzační pufr, ve kterém je cílový protein rozpustný a který je kompatibilní s následnými purifikačními procesy, např. minimální množství EDTA nebo DTT, pokud bude použita kolona Ni-NTA.
    Rozmraženou buněčnou pastu znovu rozpusťte v lyzačním pufru. Na každý gram buněčné pasty použijte 2-10 ml lyzačního pufru.
    Přidejte Turbo Nuclease na 2,5 jednotky/ml.
    Po 15 minutách vznikne tekutý "vodný" roztok.

Vybrané odkazy:
Benedik et al. (1998) Serratia marcescens and its extracellular nuclease. FEMS Microbiol. Lett. 165 (1):1.