SampleIN™ Direct PCR Kit
SampleIN™ Direct PCR Kit je prémiový nástroj pro rychlou přímou PCR, která eliminuje potřebu zdlouhavého čištění templátu.
Detailní popis
Kit je vynikající pro přímou PCR z myšího ocasu nebo ucha, savčích tkání, vlasového folikulu, bukálních výtěrů a krve.
Rychlá 15minutová extrakce DNA pomocí DPK Lysis a proteázových pufrů v jedné zkumavce vytváří PCR templátový extrakt, který je dále amplifikován za podmínek rychlého cyklování s hot-start Taq master mixem, který obsahuje červené barvivo pro přímé nanášení gelu.
Ve 2% agarózovém TAE gelu migruje červené barvivo s~350 bp DNA, v 1% agarózovém TAE gelu s~600 bp DNA fragmenty.
ALLin™ HS Red Taq Mastermix obsahuje Taq DNA polymerázu s horkým startem, která zajišťuje vysoký výtěžek, specifickou amplifikaci s nízkým pozadím. Komponenty mixu umožňují rychlé cyklování PCR a zvyšují úspěšnost při práci s komplexními šablonami nebo multiplexováním. Generované A-tailed PCR produkty jsou vhodné pro ligaci do TA klonovacích vektorů, sekvenování a další aplikace.
Sample Guidelines
Sample amounts can be slightly increased for better yields, but too much material may cause inefficient lysis and PCR inhibition.
| Sample (fresh or frozen) | Amount | Extraction vol. |
| Mouse tail | 2 mm or 3-5 mg | 100 µl |
| Mouse ear | 2 mm2 or 3-5 mg | 100 µl |
| Mammalian tissue | 5 mg | 100 µl |
| FFPE Tissue | 2 mm2 of 10 µm section | 100 µl |
| Blood (fresh/EDTA) | 2 µl | 100 µl |
| Blood Guthrie cards | 2 mm2 | 100 µl |
| Blood FTA/FTA Elute cards | 2 mm2 | 100 µl |
| Hair follicle | 2 follicles | 100 µl |
| Buccal swab | 1 swab | 300 µl |
Sample extraction procedure:
- Take typical measures to prevent contamination, keep your bench clean, wear gloves, and use sterile tubes.
- Thaw DPK Buffers at room temperature. Mix well before use.
- Prepare a 100 µl extraction reaction in a sterile vial (use 3x larger volumes of all reagents for buccal swab):
| Sample | As indicated above in SAMPLE GUDELINES |
| DPK Lysis Buffer, 5X | 20 μl |
| DPK Protease Buffer, 10X | 10 μl |
| PCR Water (not supplied) | 70 μl |
|
|
| Lysis | 75°C - 5 min. Vortex twice during lysis. |
| Protease inactivation | 95°C - 10 min |
- Add 900 µl of PCR Water. Centrifuge 1 min to pellet cell debris.
- Remove supernatant into the sterile tube.
- Store it at -20°C for several months or use immediately for PCR.
Perform PCR reaction:
- Include a no-template control and positive control in parallel.
- Thaw and keep PCR reagents on ice. Mix well before use.
| Rev. & For. Primers | 0.1-0.4 µM final each (≤ 2 µl of 10 µM) |
| Template | 1-5 µl of extraction supernatant |
| PCR Water | to 25 μl |
| ALLin™ HS Red Taq Mastermix, 2X (also available separately) | 25 µl |
Mix gently. Place into the PCR instrument set like:
| Initial denaturation | 1 cycle: 95°C - 2 min |
| Denaturation | 40 cycles: 95°C - 15 sec |
| Annealing | 40 cycles: 55-65°C – 15 sec |
| Extension | 40 cycles: 72°C – 15 sec/kb (90 sec for multiplex) |
- In a 2% agarose TAE gel the red dye migrates with~350 bp DNA, in 1% agarose TAE gel with ~ 600 bp DNA fragments.
- Store probes for short time on ice, for long at -20°C.
Hodnocení produktu
Produkt zatím nikdo nehodnotil, buďte první!