PCRbeam™Fast PCR Detection Kit

Detailní popis

Detekce je založena na imunologické reakci řízené biotinem a FITC (fluorescein isothiokyanát), takže amplifikovaná DNA musí obsahovat značky Biotin a FITC. PCR amplifikace musí být provedena s jedním primerem značeným FITC na 5'-konci a jedním primerem značeným biotinem na 5'-konci. Alternativně může být použití jednoho ze značených primerů nahrazeno genově specifickou FITC nebo biotinem značenou sondou. Sada obsahuje PCRbeam™ Membrane Strips, které jsou potaženy biotin-ligandem na testovacím proužku a anti-králičí protilátkou na kontrolním proužku. Spodní část proužku, který se používá pro aplikaci vzorku, obsahuje anti-FITC protilátku navázanou na částice zlata. PCRbeam™ Detection Buffer je Tris-pufrovaný fyziologický roztok umožňující detekci.
PCRbeam™ Fast PCR Detection Kit lze použít pro zavedené testy nebo testy domácího vaření jako rychlou a citlivou metodu detekce ano/ne. Citlivost detekce je až 100krát vyšší než citlivost dosažitelná u gelů obarvených ethidiumbromidem, což představuje ekologicky šetrnou a ekonomickou alternativu k použití mutagenních barviv.
Pro stanovení citlivých testů na bázi PCR před detekcí PCRbeam™ doporučujeme použití hot-start PCR enzymů nebo master mixů, jako je highQu ALLin™ Hot Start Taq Mastermix nebo ALLin™ Hot Start Taq DNA polymeráza.
Princip: Membránový proužek se namočí na 10 minut do lahvičky s detekčním pufrem smíchaným s produktem PCR. Boční tok vzorku poháněný částicemi zlata posouvá roztok nahoru po proužku. Řetězec DNA značený FITC se váže s protilátkou anti-FITC na zlaté částici a řetězec DNA značený biotinem je zachycen biotinovým ligandem připojeným k testovacímu proužku. Protože oba řetězce DNA zůstávají hybridizované při pokojové teplotě, testovací proužek vytvoří agregát, který se vyvine červeno-modré. Přebytečné částice zlata, které nebyly zachyceny FITC, se pohybují po proužku nahoru a anti-FITC protilátka se naváže na anti-králičí protilátku a vytvoří červeno-modrý kontrolní proužek.
Pokud v reakci není žádný produkt PCR, bude viditelný pouze kontrolní proužek. Pokud existuje specifický produkt, testovací proužek bude také obarven.