MuA Transposase (concentrated)

Detailní popis

Během lytické fáze životního cyklu fága replikuje tento mechanismus svůj genom opakovanou transpozicí uvnitř hostitelského genomu. Transpoziční reakce Mu byla modifikována na reakci in vitro katalyzovanou jediným enzymem - transpozázou MuA. V tomto systému je jedna reakce in vitro schopna generovat více než milion klonů transpozičních inzercí.

Vlastnosti

Systém generování mutací (MGS Kit) a systém generování stop (STOP Kit) byly vyvinuty pro funkční analýzu proteinů. Tyto nové transpozonové nástroje umožňují vytvářet nasycené knihovny mutovaných proteinů v jediné reakci s kratší dobou práce než jakákoli jiná metoda. Umístění transpozonové inzerce v každém mutovaném klonu lze mapovat buď pomocí PCR, nebo sekvenováním. Pomocí souprav MGS a STOP jsou tisíce mutovaných klonů připraveny ke studiu exprese za pouhé 2 až 3 dny.

Sada MGS Kit obsahuje kompletní sadu činidel pro transpozonovou mutagenezi jakéhokoli cílového proteinu na bázi skenování linkerů. Entranceposony MGS jsou určeny k provádění jemných změn ve struktuře cílového proteinu vložením 15 bp linkerů v rámci celého příslušného cílového genu. Toto vložení v rámci umožňuje zachování navazujících sekvencí.

Entranceposony STOPKit obsahují translační stop kodony ve všech třech čtecích rámcích v terminální části transpozonové sekvence. Patentovaná modifikace systému Stop Generation System umožňuje generovat nasycenou knihovnu C-terminálních delecí prakticky z jakéhokoli cílového proteinu s maximálním přídavkem tří aminokyselin.

Vlastnosti:

Efektivita - vytváření nasycených knihoven inzercí pro sekvenování a analýzu proteinů v jediné reakci.
Rychlý-Snížení času práce v porovnání s konvenčními metodami
Náhodnost-Eliminuje preferenci cílového místa nebo horkého místa inserce

Aplikace

Sada STOP Kit vytváří zkrácené proteiny pro funkční testy:

- enzymů
- Receptorů
- strukturních proteinů atd.

Sada MGS Kit generuje náhodné in vitro inserce patnácti párů bází do jakékoli cílové DNA pro:

- Rychlé generování knihoven in-frame inzercí pěti aminokyselin jakéhokoli proteinu pro funkční analýzy.
- rychlou a náhodnou mutagenezi klonovaných promotorů a jiných regulačních oblastí DNA
- náhodné vložení místa restrikčního enzymu NotI do libovolného klonu cílové DNA

Výhody
Sada MGS

- Tisíce různých inzerce klonů z jediné reakce
- Generuje náhodné inserce 5 aminokyselin ve všech 3 čtecích rámcích
- Krátké inzerce v rámci; žádné stop kodony
- Flexibilita při mapování zájmových mutantů: mutace lze snadno mapovat pomocí NotI nebo PCR
- Rychlejší a účinnější než mutageneze skenováním linkerů
- Sada STOP

- Nasycená knihovna zkrácených proteinů z jediné reakce za dva dny
- Translační STOP kodon ve všech třech čtecích rámcích
- Sekvence cílové DNA může být neznámá
- Rychlejší a účinnější než konvenční metody
- Nejsou nutné žádné specifické primery

Související produkty
Sada pro generování mutací
Transpozáza MuA