FastAP™ Termosenzitivní alkalická fosfatáza
Kód produktu: EF0652
Kód výrobce: EF0652
Kód dodavatele: {E316E969-F420-4CC0-A3CA-F5A82DBF6439}
Výrobce:
Life Technologies Czech Republic s.r.o.
Termosenzitivní alkalická fosfatáza katalyzuje odstraňování 5'- a 3'-fosfátových skupin z DNA, RNA, nukleotidů a proteinů.
Detailní popis
FastAP Termosenzitivní alkalická fosfatáza katalyzuje uvolňování 5'- a 3'-fosfátových skupin z DNA, RNA a nukleotidů. Tento enzym také odstraňuje fosfátové skupiny z proteinů.
FastAP je nová alkalická fosfatáza, která je aktivní ve všech pufrech pro restrikční enzymy Thermo Scientific i v pufrech pro PCR. Odfosforyluje všechny typy konců DNA (tupé, 5'- a 3'- převisy) za 10 minut při 37 °C. Enzym se inaktivuje za 5 minut při 75 °C (viz obrázek 1 v podpůrných údajích). Proto není nutné před ligací odstraňovat alkalickou fosfatázu.
Důležité informace
- Rekombinantní enzym
- Rychlá defosforylace - 10 minut při 37 °C
- Rychlá a úplná inaktivace - 5 minut při 75 °C
- Současné štěpení a defosforylace DNA vektoru
- 100% aktivní v pufrech restrikčních enzymů a PCR
- Jeden protokol pro všechny typy konců DNA:
- 5’-převisy
- 3’-převisy
- tupé konce
- jednotlivé nukleotidy
- Vyčištění PCR ve spojení s Exo I
- Defosforylace proteinů
Aplikace
- Defosforylace DNA klonovacího vektoru, aby se zabránilo recirkulaci během ligace
- Současné štěpení a defosforylace DNA vektoru
- Vyčištění PCR produktu: degradace nukleotidů před sekvenováním PCR produktu
- Defosforylace 5'-konců nukleových kyselin před značením polynukleotidovou kinázou T4
- Další aplikace, kde je nutná defosforylace substrátů DNA a RNA
- Defosforylace proteinů
Poznámky
- Vazba termosenzitivní alkalické fosfatázy FastAP na DNA může mít za následek posun pásů v agarosových gelech. Abyste tomu zabránili, inkubujte vzorky s 6X DNA Loading Dye & SDS Solution při 65 °C po dobu 10 minut a před elektroforézou je zchlaďte na ledu.
- Termosenzitivní alkalická fosfatáza FastAP je aktivní ve všech pufrech restrikčních enzymů a lze ji přidat přímo k trávené DNA. Tepelná inaktivace restrikčního enzymu před defosforylační reakcí není nutná.
| 10X FastAP pufr | 100 mM Tris-HCl (pH 8,0 při 37 °C),50 mM MgCl2, 1 M KCl, 0,2 % TritonX-100 a 1 mg/ml BSA. |
| Definice jednotky aktivity | Jedna jednotka je množství enzymu potřebné k defosforylaci 1 µg linearizované pUC57 DNA5'-termini za 10 minut při 37 °C v pufru FastAP. |
| Nebezpečné | Ne |
| Inaktivace | Inaktivuje se zahřátím na 75 °C po dobu 5 min. |
| Inhibice | Inhibitory: chelátory kovů. |
| Kontrola kvality |
|
| Zdrojové | Zdrojové buňky E. coli s klonovaným bakteriálním genem AP |
| Skladovací pufr | Enzym se dodává v: 20 mM HEPES-NaOH (pH 7,4), 1 mM MgCl2, 0,1 mMZnCl2, 0,1 % Triton X-100 a 50 % (v/v) glycerolu. |
| Podmínky skladování | -20 C |
Hodnocení produktu
Produkt zatím nikdo nehodnotil, buďte první!