ANDiS FAST SARS-CoV-2 RT-qPCR Detection Kit na 100 testů/1 kit

Detailní popis

Účel použití

ANDiS FAST SARS-CoV-2 RT-qPCR Detection Kit je test založený na reverzní transkriptázové polymerázové řetězové reakci v reálném čase (RT-qPCR) a je určený ke kvalitativní detekci nukleové kyseliny ze SARS-CoV-2 v orofaryngeálních výtěrech. Výsledkem je detekce RNA SARS-CoV-2. RNA je obecně detekovatelná v orofaryngeálním výtěru při akutní fázi. Pozitivní výsledky svědčí o přítomnosti RNA SARS-CoV-2. Pozitivní výsledky nevylučují bakteriální infekce nebo koinfekce jinými viry.

Negativní výsledky nevylučují infekci SARS-CoV-2 a neměly by být použity jako jediný podklad pro léčbu nebo jiné rozhodnutí o klinickém managmentu. Negativní výsledky musí být kombinovány s klinickými údaji, anamnézou pacienta, informacemi o nedávné expozici a epidemiologickými informacemi. Hladina SARS-CoV-2, která by byla přítomna v orofaryngeálních výtěrech z jedinců s časnou infekcí, není známa. Proto musí být negativní výsledky kombinovány s klinickými pozorováními, anamnézou pacienta a epidemiologickými informacemi.

Potřebný materiál, který není součástí kitu

• ANDiS 350 Automated Nucleic Acids Extraction System (kat.č. 3105020003)

• ANDiS Viral RNA Auto Extraction & Purification Kit (kat.č. 3103010025,64 testů)

• Mikrocentrifuga

• Vortex

• Jedno- a více-kanálové pipety

• Pipetovací špičky (upřednostňují se špičky 10 μl, 200 μl a 1000 μl s filtry)

• 100% ethanol, reagencie ACS nebo ekvivalent

• 1,5 ml mikrocentrifugační zkumavky (bez DNázy / RNázy)

• 2 ml mikrocentrifugační zkumavky (bez DNázy / RNázy)

• 0,2 ml PCR reakční destičky / zkumavky

• MicroAmp Optical 8-tube Strips (Applied Biosystems; kat.č. 4316567)

• MicroAmp Optical 8-cap Strips (Applied Biosystems; kat.č. 4323032)

Skladování a doba použitelnosti

• Kit je skladován při -20 ± 5 °C a doba použitelnosti je 12 měsíců.

• Chraňte reakční směs RT-qPCR obsahující fluorogenní sondy před světlem a uschovejte reagenční a reakční zkumavky co nejvíce zavřené nebo zakryté.

• Směs enzymů musí být během přípravy a používání po celou dobu rozmrazena a udržována na studeném bloku. Vyhněte se více než 10ti cyklům zmrazení a rozmrazení.

• Před použitím vždy zkontrolujte datum expirace. Nepoužívejte reagencie po uplynutí doby použitelnosti.

Princip metody

Detekční kit ANDiS FAST SARS-CoV-2 RT-qPCR je jednokroková reverzní transkriptázová polymerázová řetězová reakce v reálném čase (RT-qPCR) pro kvalitativní detekci specifické RNA SARS-CoV-2. Detekční kit ANDiS FAST SARS-CoV-2 RT-qPCR obsahuje všechna činidla potřebná pro RT-qPCR, 3 sady primerů a sondy určené k detekci RNA SARS-CoV-2 v orofaryngeálních výtěrech a 1 sadu primerů a sond určených k detekci RNáza P. RNáza P slouží jako kontrola odběru vzorku, extrakce nukleových kyselin a PCR amplifikace.

Detekční kit ANDiS FAST SARS-CoV-2 RT-qPCR je jednokrokový test RT-qPCR v jedné zkumavce, kde nejdříve probíhá reverzní transkripce specifických RNA templátů do cDNA a následně je cDNA amplifikována v QuantStudio^TM 5 Real-Time PCR System nebo Bio-Rad CFX-96 Deep Well Dx System. V tomto procesu sonda nasedá na konkrétní cílovou sekvenci, která se nachází mezi přímým a zpětným primerem. Během fáze prodloužení v PCR cyklu 5'-nukleázová aktivita Taq polymerázy štěpí sondu, což způsobí oddělení reportérového barviva od zhášecího barviva a generování fluorescenčního signálu. S každým cyklem se od příslušných sond odštěpí další molekuly reportérového barviva, čímž se zvýší intenzita fluorescence. Intenzita fluorescence je monitorována v každém PCR cyklu přístrojem Real-Time PCR.

Kompatibilní přístroje

• ABI QuantStudioTM 5 Real-Time PCR Instrument (96 jamek, blok 0,2 ml)

• Bio-Rad CFX-96 Deep Well Dx Systems

A další přístroje jsou dole v tabulce- kompatibilních přístrojů

Požadavky na vzorky

1. Použitelný typ vzorku: orofaryngeální výtěr

2. Odběr vzorků:

Viz Prozatímní pokyny pro odběr, manipulaci a testování klinických vzorků od pacientů (Interim Guidelines for Collecting, Handling, and Testing Clinical Specimens from Patients). Odběr vzorků provádějte podle pokynů výrobce zařízení, abyste provedli odběr vzorku správně.

Výtěry by měly být odebírány pouze pomocí tamponů se syntetickou špičkou, jako je nylon nebo Dacron ®, a hliníkovým nebo plastovým dříkem. Tampony z alginátu vápenatého jsou nepřijatelné a bavlněné tampony s dřevěnými dříky se nedoporučují. Okamžitě vložte tampony do sterilních zkumavek obsahující virové médium.    

3. Skladování a přeprava vzorků

Vzorky orofaryngeálních výtěrů skladujte při teplotě 2–8 °C a přepravujte je přes noc do testovacího zařízení na ledovém vaku. Pokud je vzorek zmrazen na -70 °C nebo nižší, přepravujte ho přes noc do testovacího zařízení na suchém ledu. U vzorků skladovaných při 2-8 ℃ se doporučuje nepřesáhnout 1 den. U vzorků skladovaných při -20 ± 5 °C se doporučuje nepřesáhnout 7 dní. Je třeba se vyhnout opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků.

Vzorky musí být zabaleny, odeslány a přepravovány v souladu s aktuálním vydáním nařízení o nebezpečném zboží Mezinárodní asociace pro leteckou dopravu (IATA). Při zasílání potenciálních vzorků SARS-CoV-2 se řiďte přepravními předpisy pro biologickou látku UN 3373, kategorie B.     

Varování a bezpečnostní opatření

• Komponenty v kitech různých šarží nelze zaměňovat.

• Tento produkt se používá pouze pro testy in vitro. Před experimentem si prosím pečlivě přečtěte návod k použití.

• Všichni uživatelé, analytici a jakékoli osoby hlásící diagnostické výsledky by měli být vyškoleni kompetentním instruktorem, aby provedli tento postup správně. Před provedením testu by měli všichni prokázat svou schopnost provést test samostatně a interpretovat výsledky.

• Se všemi vzorky zacházejte jako s infekčními podle bezpečnostních laboratorních postupů. Zpracování vzorků by mělo být prováděno v souladu s národními předpisy o biologické bezpečnosti.    

• Provádějte všechny manipulace se vzorky živých virů v biohazard boxu (BSC) třídy II (nebo vyšší).

•Pokud existuje podezření na infekci SARS-CoV-2 na základě současných klinických a epidemiologických screeningových kritérií doporučených orgány veřejného zdraví, vzorky by měly být odebírány s příslušnými preventivními opatřeními proti infekci.    

• Použijte samostatné a oddělené pracovní oblasti pro (1) přípravu vzorků, (2) nastavení reakce a (3) amplifikaci/detekci. Pracovní postup v laboratoři by měl probíhat jednosměrně. Vždy používejte jednorázové rukavice v každé oblasti a před vstupem do různých oblastí je vyměňte.    

• Rozdělte materiál a vybavení do samostatných pracovních oblastí a nepřemisťujte je z jedné oblasti do druhé.    

• Vyměňujte pipetovací špičky s aerosolovou bariérou mezi všemi manuálními převody roztoků.    

• Udržujte odděleně specializované vybavení (např. pipety, mikrocentrifugy) a spotřební materiál (např. zkumavky pro mikrocentrifugu, pipetovací špičky) pro nastavení testu a manipulaci s extrahovanými nukleovými kyselinami.    

• Při přípravě testů noste čistý laboratorní plášť a jednorázové rukavice bez prášku (dříve nepoužívané).    

• Vyměňujte rukavice mezi vzorky a kdykoli je podezření na kontaminaci.

• RNA by měla být během přípravy a použití udržována na studeném bloku nebo na ledu, aby byla zajištěna její stabilita.

• Nepoužitá činidla kitu a lidské vzorky zlikvidujte v souladu s místními, státními a federálními předpisy.    

• Neměly by být používány různé šarže produktů.